體外培養(yǎng)細(xì)胞,根據(jù)它們是否能貼附在支持物上生長的特性,可分為懸浮型和貼壁型兩大類。
(一)懸浮型細(xì)胞
簡稱懸浮細(xì)胞。在體外培養(yǎng)時,這些細(xì)胞屬于非貼壁依賴的細(xì)胞,這些細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)膜也會與培養(yǎng)液底發(fā)生黏連,但最多不超過5%的表面與培養(yǎng)液底發(fā)生類似于細(xì)胞連接樣的黏連,顯微視場下細(xì)胞往往呈球形。
懸浮型細(xì)胞主要是來源于血液、淋巴組織的細(xì)胞,骨髓瘤構(gòu)建的各種雜交瘤細(xì)胞,某些腫瘤細(xì)胞和轉(zhuǎn)化細(xì)胞。
細(xì)胞呈圓形,一般不貼于支持物上,呈懸浮生長。這類細(xì)胞容易大量繁殖。
體外培養(yǎng)的細(xì)胞類型中,少數(shù)細(xì)胞種類在培養(yǎng)時不貼附于支持物上,而以懸浮狀態(tài)生長,包括一些取自血、脾或骨髓的原代細(xì)胞,尤其是血液白細(xì)胞,以及一些腫瘤細(xì)胞。某些來源于此類細(xì)胞的細(xì)胞株或細(xì)胞系也呈懸浮狀態(tài)生長。
細(xì)胞懸浮生長時可以呈單個細(xì)胞或細(xì)小的細(xì)胞團,胞體為圓形。其優(yōu)點是在培養(yǎng)液中生長,生存空間大,允許長時間生長,便于大量繁殖。
屬于懸浮型細(xì)胞常見的細(xì)胞株系有小鼠腹水瘤S180、小鼠骨髓瘤NS1和SP2/0,人造血系腫瘤細(xì)胞U937(見文章結(jié)尾圖片)、HL60、K562(見文章結(jié)尾圖片)等。技術(shù)詳情聯(lián)系靶點科技技術(shù)支持。
(二)貼壁型細(xì)胞
簡稱貼壁細(xì)胞。在體外培養(yǎng)時,貼壁型細(xì)胞就是那些貼壁依賴的細(xì)胞,在匯合成單層生長以前,它們的細(xì)胞質(zhì)膜超過30%的表面與培養(yǎng)液底發(fā)生類似與細(xì)胞連接樣的黏連,顯微視場下細(xì)胞一般為扁平狀的各種形態(tài)。需要注意的是,貼壁型細(xì)胞匯合生長形成單層以后,失去接觸抑制的那些細(xì)胞株或細(xì)胞系的細(xì)胞培養(yǎng)物中,常??梢娀蚨嗷蛏俚膽腋蛹?xì)胞出現(xiàn)。
貼壁型細(xì)胞包括大多數(shù)哺乳動物的淋巴和血液以外的組織細(xì)胞,以及多數(shù)腫瘤細(xì)胞。需要貼附在帶適量正電荷的固體或半固體表面才能正常生長和分裂。
大多數(shù)培養(yǎng)細(xì)胞均為貼壁型,它們必須貼附在支持物表面生長,這類細(xì)胞在體內(nèi)時各自具有其特殊的形態(tài),但在體外培養(yǎng)時貼附于支持物后形態(tài)上表現(xiàn)單一化而失去體內(nèi)原有的某些特征,多呈上皮樣或成纖維細(xì)胞樣。
正常貼壁型細(xì)胞具有接觸抑制和密度抑制的雙重特性,細(xì)胞相互接觸后可抑制細(xì)胞的運動,因此細(xì)胞不會相互重疊于其上面生長。細(xì)胞生長、匯合成片后,雖發(fā)生接觸抑制,但只要營養(yǎng)充分,仍可增殖分裂,但當(dāng)細(xì)胞數(shù)量達(dá)到一定密度后,由于營養(yǎng)的枯竭和代謝物的影響,細(xì)胞分裂停止,稱為密度抑制。
腫瘤細(xì)胞的接觸抑制及密度抑制往往減弱或消失,因此細(xì)胞可向三維空間發(fā)展,導(dǎo)致細(xì)胞堆積,并可生長至較高的終末細(xì)胞密度。
貼壁細(xì)胞類型有以下幾種常見類型
1.成纖維細(xì)胞型
細(xì)胞呈梭形、扇形、星形或不規(guī)則三角形,中央有卵圓形核,胞質(zhì)常向外伸出3-5個長短不一的突起,生長時呈放射狀。細(xì)胞匯合過程中,細(xì)胞的生長呈放射狀、火焰狀或漩渦狀。
除了真正的成纖維細(xì)胞外,凡由中胚層間充質(zhì)起源的組織,如心肌、平滑肌、成骨細(xì)胞、血管內(nèi)皮等常呈成纖維細(xì)胞形態(tài)。培養(yǎng)中細(xì)胞的形態(tài)與成纖維細(xì)胞類似時皆可稱之為成纖維細(xì)胞(圖10-2)。
2.上皮型細(xì)胞
細(xì)胞呈扁平不規(guī)則多邊形,中央有圓形核,細(xì)胞外觀透明,細(xì)胞彼此緊密相連成單層生長。生長時呈膜狀移動,處于膜邊緣的細(xì)胞總與膜相連,很少單獨行動。起源于內(nèi)、外胚層的細(xì)胞如皮膚表皮及其衍生物、消化管上皮、肝胰、肺泡上皮等皆成上皮型形態(tài)。上皮細(xì)胞傳代培養(yǎng)后形態(tài)特征逐漸趨于典型。
3.游走細(xì)胞型
呈散在生長,一般不連成片,胞質(zhì)常突起,呈活躍游走或變形運動,速度快且方向不規(guī)則。此型細(xì)胞不穩(wěn)定,有時難以和其他細(xì)胞相區(qū)別。起源于網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)的細(xì)胞屬于此類型。
4.多型細(xì)胞型
有一些細(xì)胞,如神經(jīng)細(xì)胞難以確定其規(guī)律和穩(wěn)定的形態(tài),統(tǒng)歸于此類。此類細(xì)胞在培養(yǎng)時,其形態(tài)結(jié)構(gòu)容易受培養(yǎng)條件(基質(zhì)、溫度、pH、營養(yǎng)、污染狀況和培養(yǎng)方式等)影響。
如角膜上皮細(xì)胞在膠原基質(zhì)上的形態(tài)與體內(nèi)天然形態(tài)相似,但在塑料基質(zhì)表面細(xì)胞呈單層生長,細(xì)胞呈扁平形。上皮型Hela細(xì)胞在偏酸或偏堿的培養(yǎng)環(huán)境下會停止生長,細(xì)胞形態(tài)呈梭形、不規(guī)則形,及時糾正pH后,細(xì)胞又恢復(fù)原來的正常形態(tài)。
盡管懸浮細(xì)胞無須消化,但是對于有些實驗,需要像貼壁細(xì)胞一樣固定懸浮細(xì)胞,困擾了很多實驗人員,于是有了細(xì)胞掉片一說。靶點科技懸浮細(xì)胞固定專用玻片Shi-Fix,給這個困擾提供了解決方案。無論您是要固定懸浮細(xì)胞做免疫熒光,還是固定懸浮便于刺激,亦或固定懸浮細(xì)胞用于接觸反應(yīng)。靶點科技都能給您提供方案,期待您的咨詢。
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